关键词：青蒿鳖甲颗粒；氮含量；葛根素；提取
中图分类号：R944.2+7文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)05-0024-03
Study on Extraction Process of Qinghao Biejia Granule
DENG Hong,ZHANG Shu, LIN Hua-qing, YU Chu-qin
(Institute of Medica, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China)
Abstract： Objective To approach the extraction process of Qinghao Biejia Granule. Methods Using ort hogonal design，the extraction technology was optimized by the determination of nitrogen content in Carapax trionycis．And the extraction technology of the other 6 medicine herbs was screened by the transfer rate of puerarin in radix puerariae and yield of extraction. Results The optimized extraction process was as follows: the Carapax trionycis was crushed, suffered from 24 mesh sieve, and decocted twice with 8 times amount of water each time for 4 hours; the other 6 medicine herbs were decocted twice with 9 times amount of water first for 3 hours and 8 times second for 3 hours. Conclusion The optimized extraction process of Qinghao Biejia Granule was obtained.
Key words：Qinghao Biejia Granule; nitrogen content；puerarin；extraction
青蒿鳖甲颗粒剂是在青蒿鳖甲汤的验方基础上研制而得，由青蒿、鳖甲、葛根、知母、甘草等7味中药组成。鳖甲含有骨胶原、角蛋白、碘质等；其它6味药材主要含多糖类、黄酮类、苷类，极性较大[1-4]。原方以汤剂用于感冒后期低热不退或夜热早凉、术后发热等症。方中鳖甲为角甲类药物，汤剂一般予以先煎。本研究单独提取鳖甲，以氮含量为考查指标，采用正交试验法对鳖甲的粉碎度、加水量、提取时间和提取次数等作了初步的探讨。其余6味药材以葛根素的转移率及浸出物的稠膏得率为指标，优选出最佳提取工艺，以期为工业化生产提供依据。
1材料与仪器
1.1药材
青蒿、鳖甲、葛根等购于广州市药材公司，经检验符合中国药典2005年版一部规定（其中葛根药材每1g含葛根素28.14 mg）。
1.2仪器
P680高效液相色谱仪（美国Dionex公司）；YB-IA真空恒温干燥箱（天津市光学仪器厂）；Sartorius BS110S型电子天平（北京塞多利斯天平有限公司）。
1.3试药
甲醇为色谱纯，其余均为分析纯；葛根素对照品购于中国药品生物制品检定所，供含量测定用。
2方法与结果
2.1鳖甲水煎煮工艺
2.1.1氮含量测定方法精密称取约相当1.0 g药材的煎煮液，照《中国药典》2005版一部附录IX L氮测定法[5]测定氮含量。
2.1.2鳖甲药材粒度对氮提取量的影响 取鳖甲6份，分别粉碎至不同粒度，然后各称取20.0 g，加8倍量的水煎煮2次，每次4 h，测定提取液氮含量，结果见表1。
粉碎后鳖甲提取液中氮含量明显高于未粉碎的鳖甲提取液。但是，粉碎粒度较小则过滤困难，不利于大规模生产。因此，将鳖甲粉碎至大粗粒、10目、24目粗粉3个水平，进行正交实验。
2.1.3鳖甲水煎煮正交试验 选用L9（34）正交表设计实验，因素及水平见表2。
称取同一批号样品各20.0 g，分为9组，按表2提取。提取液趁热过滤，合并滤液，放冷后，精密称取约相当于1 g药材的提取液，测定氮含量。实验结果及方差分析见表3、表4。
方差分析结果表明，A、C因素有显著性差异，其最佳方案应为A3C1B1D2，由于B因素没有显著性差异，考虑到节约能源、降低成本，故选择A3C1B2D2为最终的水煎生产工艺，即鳖甲粉碎后过24目筛，8倍量的水煎煮3次，每次4 h。
2.2 葛根、青蒿、知母等药材水提取工艺
2.2.1指标测定
2.2.1.1葛根素含量的HPLC测定[5]色谱条件：色谱柱Lichrosher C18 5 μm（4.6 mm×150 mm）；检测波长250 nm；柱温为室温；流动相为甲醇-水（25:75）；流速：1.0 mL/min。理论塔板数按葛根素峰计算应不低于4 000。
对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品适量，加30 ％乙醇制成每1 mL含0.084 mg葛根素溶液。
供试品溶液制备：取水提取液适量（约相当于1 g葛根药材），置100 mL容量瓶，加水至刻度；量取20 mL，置50 mL容量瓶，加丙酮至刻度，摇匀，离心；精密吸取上清液5 mL，置10 mL容量瓶，加30 ％乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
阴性样品制备：取葛根之外的其他5种药材经水提后按供试品溶液制备的方法制备。
样品测定：取供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。
方法专属性的考察：取供试品溶液、对照品溶液、葛根阴性对照溶液，按上述测定法操作，记录色谱图，见图1。结果显示阴性对照对测定方法无干扰。
1. 阴性样品2. 葛根素对照品3. 样品 2.2.1.2干膏收率的测定取葛根的提取液100 g，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，105℃干燥至恒重。
2.2.2 水提取工艺条件的确定
2.2.2.1吸水率的考察将葛根等6味药材按35 d处方量共285 g，浸泡至透心。滤过，称量湿药材，重为387.6 g，即吸水率为136 %；因此考虑药材吸水的影响，第1次提取时应多加1倍水。
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