关键词：蟾酥；蟾蜍；坐骨神经；动作电位；阈强度
中图分类号：Q954.67文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)05-0017-04
Influence of Toad Venom on Electrophysiological Character of Toad’s Sciatic Nerves
ZHANG Wei-wei, LI Zhao-ping, AI Hong-bin*
(College of Life Science, Shandong Normal University, Key Laboratory for Animal Anti-Stress Biology of Shandong Province, Jinan 250014, China)
Abstract：Objective To study the influence of toad venom on the electrophysiological character of toad’s sciatic nerves. Methods The toad’s sciatic nerves were divided into four groups：Group I was immersed in normal Ringer’s solution，and group Ⅱ, Ⅲ, IV were treated with 0.1 %, 0.2 % and 0.4 % toad venom solution， respectively. After the different intervals of immersion time，the amplitude，width，conduction velocity，threshold intensity, refractory period of action potentials of the sciatic nerves from each group were measured respectively. Results The toad venom solution increased significantly the duration, threshold intensity of action potentials, and prolonged refractory period of the sciatic nerves．But the conduction velocity was decreased. ConclusionThe toad venom can decrease the excitability of nerves and conduction velocity of action potentials.
Key words：toad venom; toad; sciatic nerve; action potential; threshold intensity
蟾酥是蟾蜍耳后腺及皮肤腺的分泌物，临床上主要用于拔毒消肿、定痛杀虫、抗肿瘤[1，2]等，它还能促进伤口愈合[3]，且对心率、血压有一定的影响[4]。目前蟾酥对神经系统的作用及其机制的研究处于起步阶段。据报道，蟾酥作用于神经干可导致神经干动作电位幅度下降，传导速度减慢[5]，但它对神经干的兴奋性、不应期、动作电位的时程等电生理特性的影响未见详细报道。本实验以神经冲动传导速度、神经干不应期、神经干动作电位的宽度、幅度及引起动作电位的阈强度为指标，观察不同浓度的蟾酥溶液对蟾蜍离体坐骨神经电生理特性的影响，为进一步探讨蟾酥的药理作用及作用机制提供实验依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物中华大蟾蜍（Bufo bufogargarizans Cantor），济南产，体重40±5g，雌雄不拘。
1.1.2实验药品蟾酥由本实验室自制。室温下挤压活体蟾蜍耳后腺，将液体蟾酥采集至烧杯中，自然风干后，刮下烧杯壁上的固体蟾酥，置研钵中研磨成粉状，备用。
1.1.3实验器材BL-420生物信息采集及处理系统（成都泰盟电子有限公司）；常用蛙类动物手术器械、神经屏蔽盒（南京六合泉水教学实验器材厂）。
1.2方法
1.2.1不同浓度蟾酥溶液的配制称取自制蟾酥干粉适量，以林格溶液（Ringer′s solution）为溶剂，分别配制成0.1 %，0.2 %和0.4 %的溶液，搅拌溶解，1 h后用4层纱布过滤作为供试液。
1.2.2制备蟾蜍坐骨神经干按常规方法制备蟾蜍的坐骨神经干，首先置于林格溶液中稳定10 min，然后分4组进行实验。I组为对照组，用林格溶液浸泡；Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组分别用0.1%，0.2%，0.4 %蟾酥溶液浸泡。每组分别浸泡5，10，15，20 min 4个时间段。
1.2.3坐骨神经干电生理特性各项指标的测定将坐骨神经干放置于神经屏蔽盒中，中枢端接触刺激电极，外周端接触引导电极。启动BL-420生物信息采集和处理系统。
1.2.3.1动作电位幅度、宽度的测定调整刺激强度为3 V，刺激脉冲宽度为0.3 ms，单刺激，由一对引导电极引导出复合动作电位，输入BL-420生物信息采集及处理系统，利用系统的区间测量工具分别测量动作电位上相顶点与下相最低点之间的幅度（mV）和双相动作电位起点与止点之间的时程（ms）。
1.2.3.2动作电位传导速度的测定测量刺激伪迹到动作电位起点的时间（ms），同时用直尺测量神经屏蔽盒中刺激电极的中点与第1个记录电极之间的距离（mm），据此计算动作电位的传导速度（m/s）。
1.2.3.3神经干不应期的测定选择BL-420生物信息采集和处理系统实验项目菜单下肌肉神经实验栏中“神经干兴奋不应期的测定”，设置起始波间隔为4 ms，波间隔减量为0.2 ms，刺激时间间隔为1 s，程控记录每两个连续刺激中第2个动作电位下相消失时的波间隔。
1.2.3.4阈强度测定选择BL-420系统实验项目菜单下肌肉神经实验栏中“阈强度与动作电位的关系”，设置起始刺激强度为0.3 V，刺激强度增量为0.02 V，刺激间隔为1 s，程控记录第1个动作电位出现时的刺激强度。兴奋性的高低用阈强度的倒数表示（即兴奋性＝1/阈强度）。
1.2.4统计学处理所测数据通过SPSS软件系统（SPSS Inc. Chicago, Ill., USA）计算均值、标准差，并用配对t检验和两样本均数比较t检验检测其显著性，P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1不同浓度蟾酥溶液及不同作用时间对蟾蜍坐骨神经干动作电位幅度的影响
结果见表1。随着浸泡时间的增加，Ⅰ组动作电位幅度基本无改变。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组动作电位幅度均降低，浸泡15，20 min时，与浸泡同样时间的Ⅰ组相比，动作电位幅度降低，差异有统计学意义。
2.2不同浓度蟾酥溶液及不同作用时间对蟾蜍坐骨神经干动作电位宽度的影响
结果见表2。随着浸泡时间的增加，I组动作电位的宽度无明显变化。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组动作电位的宽度均有增大。与浸泡前相比，Ⅱ组、Ⅳ组浸泡10 min、Ⅲ组浸泡15 min时动作电位宽度增大，差异有统计学意义；Ⅱ组、Ⅲ组浸泡20 min、Ⅳ组浸泡15 min后数据有极显著差异。与浸泡同样时间的Ⅰ组相比，Ⅱ组浸泡10 min、Ⅲ组浸泡15 min时动作电位宽度增大，差异有统计学意义；Ⅲ组浸泡20 min、Ⅳ组浸泡10 min后数据有极显著差异。表明动作电位宽度随蟾酥溶液浓度的增加和浸泡时间的延长而增大。
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